Biopsias a tres profundidades (3, 6, 9 cm) del musculo glúteo medio fueron obtenidas en 16 caballos mestizos de tiro criollo, en condiciones de reposo, entre 5-15 años de edad y de ambos sexos. 100 mg de cada biopsia fueron homogenizados en PBS en frio y en sobrenadante se determinó la actividad de las enzimas Citrato Sintetaza (CS), Lactato Deshidrogenasa (LDH) y Creatinfosfoquinasa (CK). Se observo un aumento significativo (p<0.05) en la actividad de la enzima CS relacionada con la profundidad de la biopsia dentro del musculo. La actividad de la enzima LDH presento una disminución significativa (p<0.05) en las biopsias más profundas respecto a las superficiales. En relacion a la actividad CK, esta no presento variaciones significativas (p>0.05) a las diferentes profundidades de biopsia. Al analizar el efecto sexo sobre la actividad enzimática, no se encontró diferencias significativas (p>0.05) entre machos y hembras. Los resultados obtenidos permiten concluir que el equino mestizo de tiro en reposo presenta un metabolismo de carácter aeróbico con una alta actividad de la enzima citrato sintetasa.